Карагай нематодасы - карагай токойлорунун экосистемаларында олуттуу экономикалык жоготууларды алып келүүчү карантиндик миграциялык эндопаразит. Бул изилдөөдө галогенделген индолдордун карагай нематоддоруна каршы нематициддик активдүүлүгү жана алардын таасир этүү механизми каралат. 5-йодоиндолдун жана авермектиндин (оң контролдук) карагай нематоддоруна каршы нематициддик активдүүлүгү окшош жана төмөнкү концентрацияларда (10 мкг/мл) жогору болгон. 5-йодоиндол тукумдуулукту, көбөйүү активдүүлүгүн, эмбриондук жана личинкалык өлүмдү жана кыймыл-аракет жүрүм-турумун төмөндөткөн. Лиганддардын омурткасыздарга мүнөздүү глутамат менен капталган хлорид каналынын рецепторлору менен молекулярдык өз ара аракеттенүүсү 5-йодоиндол, авермектин сыяктуу эле, рецептордун активдүү борборуна бекем байланат деген түшүнүктү колдойт. 5-йодоиндол ошондой эле нематоддордо ар кандай фенотиптик деформацияларды, анын ичинде органдардын анормалдуу кыйрашы/кичирейиши жана вакуолизациянын жогорулашын пайда кылган. Бул жыйынтыктар вакуолдор нематоддун метилдениши аркылуу өлүмүндө роль ойношу мүмкүн экенин көрсөтүп турат. Маанилүүсү, 5-йодоиндол эки өсүмдүк түрүнө тең (капуста жана чамгыр) уулуу эмес болчу. Ошентип, бул изилдөө айлана-чөйрөнүн шарттарында йодоиндолду колдонуу карагайдын солуп кетишин көзөмөлдөй аларын көрсөтүп турат.
Карагай токойунун нематодасы (Bursaphelenchus xylophilus) карагай токойунун нематоддоруна (PWN), карагай токойунун экосистемаларына олуттуу экологиялык зыян келтирери белгилүү болгон миграциялык эндопаразиттик нематоддорго кирет1. Карагай токойунун нематодасы козгогон карагайдын солуп кетүү оорусу (PWD) Азия жана Европа сыяктуу бир нече континенттерде олуттуу көйгөйгө айланып баратат, ал эми Түндүк Америкада нематод алынып келинген карагай түрлөрүн жок кылат1,2. Карагай дарактарынын азайышы чоң экономикалык көйгөй болуп саналат жана анын глобалдык жайылуу келечеги тынчсыздандырат3. Нематода көбүнчө төмөнкү карагай түрлөрүнө кол салат: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii жана Pinus radiata4. Карагай нематодасы - инфекциядан кийин бир нече жума же айдын ичинде карагай дарактарын өлтүрө турган олуттуу оору. Мындан тышкары, карагай нематодунун чыгышы ар кандай экосистемаларда кеңири таралган, ошондуктан инфекциянын туруктуу чынжырлары түзүлгөн1.
Bursaphelenchus xylophilus – Aphelenchoidea супертукумуна жана 102.5 кладына кирген карантиндик өсүмдүк-мите нематодасы. Нематода козу карындар менен азыктанат жана карагайлардын жыгач ткандарында көбөйүп, төрт башка личинка стадиясына өтөт: L1, L2, L3, L4 жана чоң личинка1,6. Азык-түлүк жетишсиздигинин шартында карагай нематодасы адистештирилген личинка стадиясына – dauerге өтөт, ал өзүнүн жуктуруп алуучу – карагай кабыгынын коңузун (Monochamus alternatus) мителешип, дени сак карагайларга өтөт. Дени сак кожоюндарда нематодалар өсүмдүк ткандары аркылуу тез миграцияланат жана паренхималык клеткалар менен азыктанат, бул инфекциядан кийин бир жылдын ичинде бир катар гиперсезгичтик реакцияларына, карагайдын солуп калышына жана өлүмгө алып келет1,7,8.
Карагай нематоддорун биологиялык жол менен жок кылуу көптөн бери кыйынчылык жаратып келет, карантиндик чаралар 20-кылымга барып такалат. Карагай нематоддорун жок кылуунун учурдагы стратегиялары негизинен жыгачты фумигациялоо жана дарактардын сөңгөктөрүнө нематоциддерди имплантациялоо сыяктуу химиялык дарылоону камтыйт. Эң көп колдонулган нематоциддер - авермектин тукумуна кирген авермектин жана авермектин бензоаты. Бул кымбат баалуу химиялык заттар көптөгөн нематод түрлөрүнө каршы абдан натыйжалуу жана экологиялык жактан коопсуз деп эсептелет9. Бирок, бул нематоциддерди кайталап колдонуу, Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella жана Trichostrongylus colubriformis жана Ostertagia circumcincta сыяктуу бир нече курт-кумурска зыянкечтери үчүн көрсөтүлгөндөй, туруктуу карагай нематоддорунун пайда болушуна алып келүүчү тандоо басымын жаратат деп күтүлүүдө, алар акырындык менен авермектиндерге туруктуулукту өнүктүрүштү10,11,12. Ошондуктан, PVDди көзөмөлдөө үчүн альтернативдүү, үнөмдүү жана экологиялык жактан таза чараларды табуу үчүн туруктуулук үлгүлөрүн үзгүлтүксүз изилдеп, нематоциддерди үзгүлтүксүз текшерип туруу керек. Акыркы он жылдыктарда бир катар авторлор өсүмдүк экстракттарын, эфир майларын жана учуучу заттарды нематодаларды көзөмөлдөөчү каражат катары колдонууну сунушташкан13,14,15,16.
Жакында биз Caenorhabditis elegans 17де клеткалар аралык жана падышалыктар аралык сигнал берүүчү молекула болгон индолдун нематоциддик активдүүлүгүн көрсөттүк. Индол микробдук экологияда кеңири таралган клетка ичиндеги сигнал болуп саналат, ал микробдук физиологияга, споралардын пайда болушуна, плазмиданын туруктуулугуна, дарыга туруктуулугуна, биофильмдин пайда болушуна жана вируленттүүлүгүнө таасир этүүчү көптөгөн функцияларды башкарат 18, 19. Индолдун жана анын туундуларынын башка патогендик нематодаларга каршы активдүүлүгү изилдене элек. Бул изилдөөдө биз 34 индолдун карагай нематодаларына каршы нематоциддик активдүүлүгүн изилдеп, эң күчтүү 5-йодоиндолдун таасир этүү механизмин микроскопия, убакытты кыскартуу менен сүрөткө тартуу жана молекулярдык док эксперименттерин колдонуп аныктадык жана үрөндүн өнүп чыгуу анализин колдонуп, анын өсүмдүктөргө уулуу таасирин бааладык.
Индолдун жогорку концентрациясы (>1,0 мМ) мурда нематодаларга нематициддик таасир этээри кабарланган17. B. xylophilus (аралаш жашоо этаптары) индол же 33 ар кандай индол туундулары менен 1 мМде дарылангандан кийин, B. xylophilusтун өлүмү контролдук жана дарыланган топтордогу тирүү жана өлгөн нематодаларды эсептөө менен өлчөнгөн. Беш индол олуттуу нематициддик активдүүлүктү көрсөткөн; дарыланбаган контролдук топтун жашоо деңгээли 24 сааттан кийин 95 ± 7% түзгөн. Сыналган 34 индолдун ичинен 1 мМдеги 5-йодоиндол жана 4-фтороиндол 100% өлүмгө алып келген, ал эми 5,6-дифториндиго, метилиндол-7-карбоксилат жана 7-йодоиндол болжол менен 50% өлүмгө алып келген (1-таблица).
5-йодоиндолдун вакуолдордун пайда болушуна жана карагай нематодунун метаболизмине тийгизген таасири. (A) Авермектиндин жана 5-йодоиндолдун бойго жеткен эркек нематоддорго тийгизген таасири, (B) L1 стадиясындагы нематоддун жумурткалары жана (C) B. xylophilus метаболизми, (i) 0 саатта вакуолдор байкалган эмес, дарылоо (ii) вакуолдорго, (iii) бир нече вакуолдордун топтолушуна, (iv) вакуолдордун шишигине, (v) вакуолдордун биригишине жана (vi) гигант вакуолдордун пайда болушуна алып келген. Кызыл жебелер вакуолдордун шишигенин, көк жебелер вакуолдордун биригишине, ал эми кара жебелер гигант вакуолдорду көрсөтөт. Масштаб тилкеси = 50 мкм.
Мындан тышкары, бул изилдөөдө карагай нематоддорунда метандан улам пайда болгон өлүмдүн ырааттуу процесси да сүрөттөлгөн (4C-сүрөт). Метаногендик өлүм - бул цитоплазмалык вакуолдордун топтолушу менен байланышкан апоптоздук эмес клетка өлүмүнүн түрү27. Карагай нематоддорунда байкалган морфологиялык кемчиликтер метандан улам пайда болгон өлүмдүн механизми менен тыгыз байланышта окшойт. Ар кайсы убактагы микроскопиялык изилдөө көрсөткөндөй, 5-йодоиндолго (0,1 мМ) 20 саат өткөндөн кийин гиганттык вакуолдор пайда болгон. Микроскопиялык вакуолдор 8 сааттык дарылоодон кийин байкалган жана алардын саны 12 сааттан кийин көбөйгөн. 14 сааттан кийин бир нече чоң вакуолдор байкалган. 12–16 сааттык дарылоодон кийин бир нече биригип кеткен вакуолдор даана көрүнүп турган, бул вакуолдордун биригиши метаногендик өлүм механизминин негизи экенин көрсөтүп турат. 20 сааттан кийин курттун ичинде бир нече гиганттык вакуолдор табылган. Бул байкоолор C. elegansтеги метуоздун биринчи отчетун билдирет.
5-йодоиндол менен иштетилген курттарда вакуолдордун агрегациясы жана жарылуусу да байкалган (5-сүрөт), муну курттардын ийилиши жана вакуолдордун айлана-чөйрөгө бөлүнүп чыгышы далилдейт. Жумуртка кабыгынын мембранасында да вакуолдордун бузулушу байкалган, ал адатта жумурткадан чыкканда L2 тарабынан бүтүн бойдон сакталат (кошумча S2-сүрөт). Бул байкоолор суюктуктун топтолушунун жана осморегуляциянын бузулушунун, ошондой эле кайтарылуучу клеткалык жабыркоонун (RCI) вакуолдордун пайда болушу жана ириңдөө процессине катышуусун тастыктайт (5-сүрөт).
Байкалган вакуолдордун пайда болушунда йоддун ролун гипотеза кылып, биз натрий йодидинин (NaI) жана калий йодидинин (KI) нематоциддик активдүүлүгүн изилдедик. Бирок, концентрацияларда (0,1, 0,5 же 1 мМ) алар нематоддордун жашоосуна же вакуолдордун пайда болушуна таасир эткен эмес (S5 кошумча сүрөт), бирок 1 мМ KI бир аз нематоциддик таасирге ээ болгон. Башка жагынан алганда, 7-йодоиндол (1 же 2 мМ), 5-йодоиндол сыяктуу эле, бир нече вакуолдорду жана структуралык деформацияларды пайда кылган (S6 кошумча сүрөт). Эки йодоиндол карагай нематоддорунда окшош фенотиптик мүнөздөмөлөрдү көрсөткөн, ал эми NaI жана KI көрсөткөн эмес. Кызыктуусу, индол сыналган концентрацияларда B. xylophilusта вакуолдордун пайда болушун пайда кылган эмес (маалыматтар көрсөтүлгөн эмес). Ошентип, жыйынтыктар индол-йод комплекси B. xylophilusтун вакуолизациясы жана метаболизми үчүн жооптуу экенин тастыктады.
Нематициддик активдүүлүгү текшерилген индолдордун арасында 5-йодоиндолдун эң жогорку тайгалануу индекси -5,89 ккал/моль болгон, андан кийин 7-йодоиндол (-4,48 ккал/моль), 4-фтороиндол (-4,33) жана индол (-4,03) турат (6-сүрөт). 5-йодоиндолдун лейцин 218 менен күчтүү негизги суутек байланышы анын байланышын турукташтырат, ал эми башка бардык индол туундулары каптал чынжырлуу суутек байланыштары аркылуу серин 260 менен байланышат. Башка моделдештирилген йодоиндолдордун арасында 2-йодоиндолдун байланыш мааниси -5,248 ккал/моль, бул анын лейцин менен болгон негизги суутек байланышына байланыштуу 218. Башка белгилүү байланыштарга 3-йодоиндол (-4,3 ккал/моль), 4-йодоиндол (-4,0 ккал/моль) жана 6-фтороиндол (-2,6 ккал/моль) кирет (S8 кошумча сүрөт). Көпчүлүк галогенделген индолдор жана индолдун өзү, 5-йодоиндол жана 2-йодоиндолдон тышкары, серин 260 менен байланыш түзөт. Лейцин 218 менен суутек байланышы ивермектин үчүн байкалгандай (кошумча S7-сүрөт), 5-йодоиндол жана 2-йодоиндол, ивермектин сыяктуу эле, лейцин 218 аркылуу GluCL рецепторунун активдүү борборуна бекем байланаарын тастыктайт (6-сүрөт жана S8-кошумча сүрөт). Бул байланыш GluCL комплексинин ачык тешиктүү түзүлүшүн сактоо үчүн талап кылынат жана GluCL рецепторунун активдүү борборуна бекем байлануу аркылуу 5-йодоиндол, 2-йодоиндол, авермектин жана ивермектин ион каналын ачык кармап, суюктуктун сиңишине мүмкүндүк берет деп болжолдойбуз.
Индолдун жана галогенделген индолдун GluCLге молекулярдык кошулушу. (A) индолдун, (B) 4-фториндолдун, (C) 7-йодоиндолдун жана (D) 5-йодоиндол лиганддарынын GluCLдин активдүү борборуна байланышуу багыттары. Белок лента менен көрсөтүлгөн, ал эми негизги суутек байланыштары сары пунктир сызыктар катары көрсөтүлгөн. (A′), (B′), (C′) жана (D′) тиешелүү лиганддардын айланадагы аминокислота калдыктары менен өз ара аракеттенүүсүн көрсөтөт, ал эми каптал чынжырлуу суутек байланыштары кызгылт пунктир жебелер менен көрсөтүлгөн.
5-йодоиндолдун капуста жана чамгыр уруктарынын өнүп чыгышына уулуу таасирин баалоо үчүн эксперименттер жүргүзүлдү. 5-йодоиндол (0,05 же 0,1 мМ) же авермектин (10 мкг/мл) баштапкы өнүп чыгууга жана көчөттөрдүн чыгышына анчалык деле таасир эткен эмес (7-сүрөт). Мындан тышкары, дарыланбаган контролдук топтун жана 5-йодоиндол же авермектин менен дарыланган үрөндөрдүн өнүп чыгуу ылдамдыгынын ортосунда эч кандай олуттуу айырмачылык табылган жок. Тамырдын узундугуна жана пайда болгон каптал тамырлардын санына тийгизген таасири анчалык деле маанилүү болгон эмес, бирок 1 мМ (анын активдүү концентрациясынан 10 эсе көп) 5-йодоиндол каптал тамырлардын өнүгүшүн бир аз кечеңдетти. Бул жыйынтыктар 5-йодоиндолдун өсүмдүк клеткалары үчүн уулуу эмес экенин жана изилденген концентрацияларда өсүмдүктөрдүн өнүгүү процесстерине тоскоол болбостугун көрсөтүп турат.
5-йодоиндолдун үрөндүн өнүп чыгышына тийгизген таасири. Мурашиге жана Скуг агар чөйрөсүндө авермектин же 5-йодоиндол кошулган же кошулбаган B. oleracea жана R. raphanistrum үрөндөрүнүн өнүп чыгышы, өнүп чыгышы жана каптал тамырлашы. Өнүп чыгышы 22°C температурада 3 күн инкубациядан кийин катталган.
Бул изилдөөдө индолдор менен нематоддордун өлтүрүлүшүнүн бир нече учурлары жөнүндө айтылат. Маанилүүсү, бул карагай ийнелеринде йодоиндолдун метилденүүсүн (кичинекей вакуолдордун топтолушунан келип чыккан процесс, алар акырындык менен ири вакуолдорго биригип, акыры мембрананын жарылышына жана өлүмүнө алып келет) индукциялаганы тууралуу биринчи отчет, йодоиндол коммерциялык нематоцид болгон авермектинге окшош олуттуу нематициддик касиеттерди көрсөтөт.
Индолдор мурда прокариоттордо жана эукариоттордо бир нече сигнал берүү функцияларын аткараары, анын ичинде биофильмдин ингибирлениши/пайда болушу, бактериялардын жашоосу жана патогендүүлүгү жөнүндө кабарланган19,32,33,34. Жакында галогенделген индолдордун, индол алкалоиддеринин жана жарым синтетикалык индол туундуларынын потенциалдуу терапиялык таасири кеңири изилдөө кызыгуусун жаратты35,36,37. Мисалы, галогенделген индолдор туруктуу Escherichia coli жана Staphylococcus aureus клеткаларын өлтүрөрү көрсөтүлдү37. Мындан тышкары, галогенделген индолдордун башка түрлөргө, урууларга жана падышалыктарга каршы эффективдүүлүгүн изилдөө илимий кызыгууну жаратат жана бул изилдөө бул максатка жетүү үчүн жасалган кадам болуп саналат.
Бул жерде биз C. elegans клеткаларында 5-йодоиндолдон улам келип чыккан өлүмгө алып келүүчү механизмди сунуштайбыз, ал кайтарылуучу клеткалык жабыркоого (RCI) жана метилденүүгө негизделген (4C жана 5-сүрөттөр). Шишик жана вакуолярдык дегенерация сыяктуу шишиктүү өзгөрүүлөр RCI жана метилденүүнүн көрсөткүчтөрү болуп саналат, алар цитоплазмада ири вакуолдор катары көрүнөт48,49. RCI АТФ өндүрүшүн азайтуу, АТФаза насосунун иштебей калышына алып келүү же клетка мембраналарын бузуп, Na+, Ca2+ жана суунун тез агып киришине алып келүү менен энергия өндүрүшүнө тоскоол болот50,51,52. Жаныбар клеткаларында Ca2+ жана суунун агып киришинен улам цитоплазмада суюктуктун топтолушунун натыйжасында цитоплазма ичиндеги вакуолдор пайда болот53. Кызыгы, клетканын бузулушунун бул механизми, эгерде бузулуу убактылуу болсо жана клеткалар белгилүү бир убакытка чейин АТФ өндүрө баштаса, кайтарылгыс, бирок бузулуу улана берсе же күчөсө, клеткалар өлөт.54 Биздин байкоолорубуз көрсөткөндөй, 5-йодоиндол менен дарыланган нематодалар стресстик шарттарга дуушар болгондон кийин кадимки биосинтезди калыбына келтире алышпайт.
B. xylophilus'та 5-йодоиндол тарабынан индукцияланган метилдөө фенотипи йоддун болушуна жана анын молекулярдык таралышына байланыштуу болушу мүмкүн, анткени 7-йодоиндол B. xylophilus'ка 5-йодоиндолго караганда азыраак ингибирлөөчү таасир тийгизген (1-таблица жана S6 кошумча сүрөт). Бул жыйынтыктар Maltese et al. (2014) изилдөөлөрүнө жарым-жартылай дал келет, алар индолдогу пиридил азот бөлүгүнүн пара- позициядан мета- позицияга транслокациясы U251 клеткаларында вакуолизацияны, өсүүнү ингибирлөөнү жана цитотоксикалыкты жокко чыгарганын билдиришкен, бул молекуланын белоктогу белгилүү бир активдүү борбор менен өз ара аракеттенүүсү өтө маанилүү экенин көрсөтүп турат27,44,45. Бул изилдөөдө байкалган индол же галогенделген индолдор менен GluCL рецепторлорунун ортосундагы өз ара аракеттенүүлөр да бул түшүнүктү колдойт, анткени 5- жана 2-йодоиндол изилденген башка индолдорго караганда GluCL рецепторлору менен күчтүүрөөк байланышат (6-сүрөт жана S8 кошумча сүрөт). Индолдун экинчи же бешинчи позициясындагы йод GluCL рецепторунун лейцини 218 менен негизги суутек байланыштары аркылуу байланышаары аныкталган, ал эми башка галогенделген индолдор жана индолдун өзү серин 260 менен алсыз каптал чынжырлуу суутек байланыштарын түзөт (6-сүрөт). Ошондуктан, галогендин локализациясы вакуолярдык дегенерацияны индукциялоодо маанилүү ролду ойнойт деп божомолдойбуз, ал эми 5-йодоиндолдун тыгыз байланышы ион каналын ачык кармап турат, ошону менен суюктуктун тез агып киришине жана вакуолдун жарылышына мүмкүндүк берет. Бирок, 5-йодоиндолдун таасир этүү механизминин деталдуу аныкталышы керек.
5-йодоиндолго практикалык колдонуудан мурун, анын өсүмдүктөргө тийгизген уулуу таасирин талдоо керек. Биздин үрөндөрдүн өнүп чыгуусу боюнча эксперименттерибиз 5-йодоиндолго изилденген концентрацияларда уруктун өнүп чыгышына же андан кийинки өнүгүү процесстерине эч кандай терс таасир тийгизбегенин көрсөттү (7-сүрөт). Ошентип, бул изилдөө карагай нематодаларынын карагай дарактарына зыяндуулугун көзөмөлдөө үчүн экологиялык чөйрөдө 5-йодоиндолго кайрылууга негиз берет.
Мурунку отчеттордо индолго негизделген терапия антибиотиктерге туруктуулук жана рактын өнүгүшү көйгөйүн чечүүнүн потенциалдуу ыкмасы экени көрсөтүлгөн55. Мындан тышкары, индолдор антибактериалдык, ракка каршы, антиоксидант, сезгенүүгө каршы, диабетке каршы, вируска каршы, пролиферативдик жана кургак учукка каршы активдүүлүккө ээ жана дары-дармектерди иштеп чыгуу үчүн келечектүү негиз боло алат56,57. Бул изилдөө биринчи жолу йодду мите курттарга каршы жана антигельминттик каражат катары колдонуу мүмкүнчүлүгүн сунуштайт.
Авермектин отуз жыл мурун ачылып, 2015-жылы Нобель сыйлыгына ээ болгон жана аны антигельминтик катары колдонуу дагы эле активдүү уланууда. Бирок, нематодаларда жана курт-кумурска зыянкечтеринде авермектиндерге туруктуулуктун тез өнүгүшүнө байланыштуу, карагай дарактарындагы PWN инфекциясын көзөмөлдөө үчүн альтернативдүү, арзан жана экологиялык жактан таза стратегия керек. Бул изилдөөдө ошондой эле 5-йодоиндолдун карагай нематодаларын кантип жок кылаары жана 5-йодоиндолдун өсүмдүк клеткаларына уулуулугу төмөн экени айтылат, бул аны келечекте коммерциялык колдонуу үчүн жакшы мүмкүнчүлүктөрдү ачат.
Бардык эксперименттер Кореянын Кёнсан шаарындагы Ёнгнам университетинин Этика комитети тарабынан бекитилген жана методдор Ёнгнам университетинин Этика комитетинин көрсөтмөлөрүнө ылайык жүргүзүлгөн.
Жумурткаларды инкубациялоо боюнча эксперименттер белгиленген процедураларды колдонуу менен жүргүзүлдү43. Инкубациялоо ылдамдыгын (HR) баалоо үчүн, 1 күндүк чоң нематодалар (болжол менен 100 ургаачы жана 100 эркек) козу карын камтылган Петри чөйчөктөрүнө которулуп, 24 саат бою өстүрүлдү. Андан кийин жумурткалар бөлүнүп алынып, стерилденген дистилденген сууда 5-йодоиндол (0,05 мМ жана 0,1 мМ) же авермектин (10 мкг/мл) менен суспензия катары иштетилди. Бул суспензиялар (500 мкл; болжол менен 100 жумуртка) 24 чуңкурлуу ткандарды өстүрүүчү плитанын чуңкурларына которулуп, 22 °C температурада инкубацияланды. L2 эсептөөлөрү 24 саат инкубациядан кийин жүргүзүлдү, бирок эгерде клеткалар майда платина зымы менен стимулдаштырылганда кыймылдабаса, өлгөн деп эсептелди. Бул эксперимент эки этапта жүргүзүлдү, ар бири алты жолу кайталанды. Эки эксперименттин маалыматтары бириктирилип, көрсөтүлдү. HR пайызы төмөнкүдөй эсептелет:
Личинкалардын өлүмү мурда иштелип чыккан процедураларды колдонуу менен бааланган. Нематодалардын жумурткалары чогултулуп, эмбриондор стерилдүү дистилденген сууда L2 стадиясындагы личинкаларды пайда кылуу менен синхрондоштурулган. Синхрондоштурулган личинкалар (болжол менен 500 нематода) 5-йодоиндол (0,05 мМ жана 0,1 мМ) же авермектин (10 мкг/мл) менен иштетилип, B. cinerea Petri пластинкаларында өстүрүлгөн. 22°C температурада 48 саат инкубациядан кийин нематодалар стерилдүү дистилденген сууда чогултулуп, L2, L3 жана L4 стадияларынын бар-жогу текшерилген. L3 жана L4 стадияларынын болушу личинкалардын трансформациясын көрсөткөн, ал эми L2 стадиясынын болушу трансформациянын жоктугун көрсөткөн. Сүрөттөр iRiS™ санариптик клетка сүрөткө тартуу системасын колдонуу менен алынган. Бул эксперимент эки этапта жүргүзүлдү, ар бири алты жолу кайталанды. Эки эксперименттин маалыматтары бириктирилип, көрсөтүлдү.
5-йодоиндол менен авермектиндин үрөндөргө болгон уулуулугу Мурашиге жана Скуг агар плиталарындагы өнүп чыгуу тесттерин колдонуу менен бааланган.62 B. oleracea жана R. raphanistrum уруктары алгач бир күн стерилденген дистилденген сууга чыланып, 1 мл 100% этанол менен жуулуп, 1 мл 50% коммерциялык агартуучу каражат (3% натрий гипохлорити) менен 15 мүнөт стерилденип, 1 мл стерилденген суу менен беш жолу жуулган. Андан кийин стерилденген үрөндөр 0,86 г/л (0,2X) Мурашиге жана Скуг чөйрөсүн жана 0,7% бактериологиялык агарды 5-йодоиндол же авермектин менен же ансыз камтыган өнүп чыгуучу агар плиталарына басылган. Андан кийин плиталар 22 °C температурада инкубацияланып, 3 күн инкубациядан кийин сүрөттөр тартылган. Бул эксперимент эки этапта жүргүзүлүп, алардын ар бири алты жолу кайталанган.
Жарыяланган убактысы: 2025-жылдын 26-февралы