DELLA белоктору сакталган мастер болуп саналатөсүү жөнгө салуучуларыички жана айлана-чөйрөнүн сигналдарына жооп катары өсүмдүктөрдүн өнүгүшүн көзөмөлдөөдө борбордук ролду ойногон. DELLA транскрипциялык жөнгө салуучу катары иштейт жана GRAS домени аркылуу транскрипция факторлоруна (TFs) жана гистон H2A менен байланышуу аркылуу промоторлорду максаттуу түрдө тартуу үчүн тартылат. Акыркы изилдөөлөр DELLA туруктуулугу трансляциядан кийинки эки механизм аркылуу жөнгө салынаарын көрсөттү: фитогормон гиббереллин тарабынан индукцияланган полиубиквитиндештирүү, бул анын тез бузулушуна алып келет жана анын топтолушун жогорулатуу үчүн кичинекей убиквитин сымал модификаторлордун (SUMO) конъюгациясы. Мындан тышкары, DELLA активдүүлүгү эки башка гликозилдештирүү менен динамикалык түрдө жөнгө салынат: DELLA-TF өз ара аракеттенүүсү O-фукозилдештирүү менен күчөтүлөт, бирок O-байланышкан N-ацетилглюкозамин (O-GlcNAc) модификациясы менен ингибирленет. Бирок, DELLA фосфорлашуусунун ролу белгисиз бойдон калууда, анткени мурунку изилдөөлөр карама-каршы натыйжаларды көрсөттү, фосфорлашуу DELLа деградациясын күчөтөрүн же азайтарын көрсөткөндөрдөн баштап, фосфорлашуу анын туруктуулугуна таасир этпестигин көрсөткөн башка изилдөөлөргө чейин. Бул жерде биз РЕПРЕССОРдогу фосфорлашуу жерлерин аныктайбыз.ga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thalianaдан массалык спектрометриялык анализ аркылуу тазаланган жана PolyS жана PolyS/T аймактарында эки RGA пептидинин фосфорланышы H2A байланышын күчөтүп, RGA активдүүлүгүнүн жогорулашын көрсөткөн. RGAнын максаттуу промоторлор менен байланышы. Белгилей кетчү нерсе, фосфорлануу RGA-TF өз ара аракеттенүүсүнө же RGA туруктуулугуна таасир этпейт. Биздин изилдөө фосфорлануунун DELLA активдүүлүгүн индукциялоочу молекулярдык механизмин ачып берет.
DELLA функциясын жөнгө салуудагы фосфорлануунун ролун түшүндүрүү үчүн, DELLA фосфорлануу жерлерин in vivo аныктоо жана өсүмдүктөрдө функционалдык анализдерди жүргүзүү абдан маанилүү. Өсүмдүк экстракттарын аффиндик тазалоо жана андан кийин MS/MS анализин жүргүзүү аркылуу биз RGAдагы бир нече фосфозиттерди аныктадык. GA жетишсиздигинин шарттарында RHA фосфорлануусу жогорулайт, бирок фосфорлануу анын туруктуулугуна таасир этпейт. Маанилүүсү, co-IP жана ChIP-qPCR анализдери RGAнын PolyS/T аймагындагы фосфорлануунун анын H2A менен өз ара аракеттенүүсүн жана максаттуу промоторлор менен байланышын күчөтөрүн, фосфорлануунун RGA функциясын индукциялоо механизмин ачып берерин көрсөттү.
RGA LHR1 субдоменинин TF менен өз ара аракеттенүүсү аркылуу хроматинди бутага алуу үчүн тартылат, андан кийин PolyS/T аймагы жана PFYRE субдомени аркылуу H2A менен байланышып, RGAны турукташтыруу үчүн H2A-RGA-TF комплексин түзөт. DELLA домени менен GRAS доменинин ортосундагы PolyS/T аймагында Pep 2нин фосфорланышы аныкталбаган киназа тарабынан RGA-H2A байланышын күчөтөт. rgam2A мутант белогу RGA фосфорланышын жокко чыгарат жана H2A байланышына тоскоолдук кылуу үчүн башка белок конформациясын кабыл алат. Бул убактылуу TF-rgam2A өз ара аракеттенүүлөрүнүн туруксуздашына жана rgam2Aнын максаттуу хроматинден диссоциацияланышына алып келет. Бул сүрөттө RGA аркылуу транскрипциялык репрессия гана көрсөтүлгөн. RGA аркылуу транскрипциялык активация үчүн окшош үлгү сүрөттөлүшү мүмкүн, бирок H2A-RGA-TF комплекси максаттуу ген транскрипциясын күчөтөт жана rgam2Aнын депосфорланышы транскрипцияны азайтат. Сүрөт Huang et al.21ден өзгөртүлгөн.
Бардык сандык маалыматтар Excel программасын колдонуу менен статистикалык жактан талданып, ал эми олуттуу айырмачылыктар Стьюденттин t тести аркылуу аныкталган. Тандоо көлөмүн алдын ала аныктоо үчүн эч кандай статистикалык ыкмалар колдонулган эмес. Талдоодон эч кандай маалыматтар алынып салынган эмес; эксперимент кокустук түрдө тандалган эмес; изилдөөчүлөр эксперимент учурунда маалыматтардын бөлүштүрүлүшүнөн жана натыйжаларды баалоодон кабардар болушкан эмес. Тандоо көлөмү сүрөттүн легендасында жана баштапкы маалымат файлында көрсөтүлгөн.
Изилдөөнүн дизайны жөнүндө көбүрөөк маалымат алуу үчүн, ушул макалага байланыштуу Табигый портфолио отчетунун кыскача мазмунун караңыз.
Массалык спектрометрия протеомикасынын маалыматтары ProteomeXchange консорциумуна PXD046004 маалымат топтомунун идентификатору бар PRIDE66 өнөктөш репозиторийи аркылуу кошулган. Бул изилдөө учурунда алынган башка бардык маалыматтар Кошумча маалыматта, Кошумча маалымат файлдарында жана Чийки маалымат файлдарында берилген. Бул макала үчүн баштапкы маалыматтар берилген.
Жарыяланган убактысы: 2024-жылдын 8-ноябры