DELLA протеиндери консервацияланган мастерөсүү регуляторлоруички жана экологиялык сигналдарга жооп катары өсүмдүктөрдүн өнүгүшүн көзөмөлдөөдө негизги ролду ойнойт. DELLA транскрипциялык жөнгө салуучу катары иш алып барат жана анын GRAS домени аркылуу транскрипция факторлору (TFs) жана гистон H2A менен байланышуу аркылуу максаттуу промоутерлерге жалданат. Акыркы изилдөөлөр көрсөткөндөй, DELLA туруктуулугу пост-трансляциялык түрдө эки механизм аркылуу жөнгө салынат: гиббереллин фитогормону тарабынан индукцияланган полиубиквитинация, анын тез бузулушуна алып келет жана анын топтолушун жогорулатуу үчүн майда ubiquitin-like modifiers (SUMO) конъюгациясы. Мындан тышкары, DELLA иши динамикалык түрдө эки башка гликозилдөө менен жөнгө салынат: DELLA-TF өз ара аракеттенүүсү O-fucosylation менен күчөтүлөт, бирок O-байланышкан N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) модификациясы менен тоскоол болот. Бирок, DELLA phosphorylation ролу түшүнүксүз бойдон калууда, анткени мурунку изилдөөлөр карама-каршы натыйжаларды көрсөттү, фосфорлануу DELLA деградациясын көмөктөшөт же азайтат деп көрсөткөндөрдөн баштап, фосфорлануу анын туруктуулугуна таасирин тийгизбейт. Бул жерде биз РЕПРЕССОРдун фосфорлануу жерлерин аныктайбызga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thalianaдан масс-спектрометриялык анализ аркылуу тазаланган жана PolyS жана PolyS/T аймактарында эки RGA пептидинин фосфорлануусу H2A байланышын жана RGA активдүүлүгүн күчөтөрүн көрсөтөт. RGAнын максаттуу промоутерлор менен ассоциациясы. Белгилей кетчү нерсе, phosphorylation RGA-TF өз ара же RGA туруктуулугуна таасир этпейт. Биздин изилдөө phosphorylation DELLA иш түрткү молекулярдык механизмин ачып берет.
DELLA функциясын жөнгө салууда фосфорлануунун ролун түшүндүрүү үчүн DELLA фосфорлануу жайларын in vivo аныктоо жана өсүмдүктөрдө функционалдык анализдерди жүргүзүү абдан маанилүү. Өсүмдүктүн экстракттарын жакындык менен тазалоо, андан кийин MS/MS анализи аркылуу биз RGAда бир нече фосфоситтерди аныктадык. ГА жетишсиздигинин шартында RHA фосфорлануусу күчөйт, бирок фосфорлануу анын туруктуулугуна таасирин тийгизбейт. Маанилүү нерсе, co-IP жана ChIP-qPCR анализдери RGAнын PolyS/T аймагындагы фосфорлануу анын H2A менен өз ара аракеттенүүсүн жана анын максаттуу промоторлор менен байланышын шарттап, фосфорлануу RGA функциясын индукциялоо механизмин ачып берерин көрсөттү.
RGA LHR1 субдоменинин TF менен өз ара аракеттенүүсү аркылуу максаттуу хроматинге тартылат жана андан кийин анын PolyS/T аймагы жана PFYRE субдомени аркылуу H2A менен байланышып, RGA турукташтыруу үчүн H2A-RGA-TF комплексин түзөт. DELLA домени менен GRAS доменинин ортосундагы PolyS/T аймагындагы Pep 2дин аныкталбаган киназа менен фосфорлануусу RGA-H2A байланышын күчөтөт. Rgam2A мутант протеини RGA фосфорлануусун жокко чыгарат жана H2A байланышына тоскоолдук кылуу үчүн башка протеин конформациясын кабыл алат. Бул убактылуу TF-rgam2A өз ара аракеттешүүсүнүн туруксуздугуна жана rgam2Aнын максаттуу хроматинден диссоциацияланышына алып келет. Бул көрсөткүч бир гана RGA ортомчулугу менен транскрипциялык репрессияны сүрөттөйт. Окшош схеманы RGA аркылуу транскрипциялоо активдештирүү үчүн сүрөттөсө болот, H2A-RGA-TF комплекси максаттуу гендин транскрипциясына көмөктөшөт жана rgam2A дефосфорлануусу транскрипцияны азайтат. Сүрөт Huang et al.21 өзгөртүлгөн.
Бардык сандык маалыматтар Excel аркылуу статистикалык жактан талданган жана олуттуу айырмачылыктар Студенттин t тести аркылуу аныкталган. Тандоо өлчөмүн алдын ала аныктоо үчүн статистикалык ыкмалар колдонулган эмес. Эч кандай маалымат талдоодон чыгарылган; эксперимент рандомизацияланган эмес; изилдөөчүлөр эксперимент учурунда маалыматтарды бөлүштүрүү жана натыйжаларды баалоо үчүн сокур болгон эмес. Үлгү өлчөмү фигура легендасында жана баштапкы маалымат файлында көрсөтүлгөн.
Изилдөөнүн дизайны жөнүндө көбүрөөк маалымат алуу үчүн, бул макала менен байланышкан Табигый портфолио отчетунун абстракциясын караңыз.
Массалык спектрометриянын протеомикасынын маалыматтары PXD046004 маалымат топтому идентификатору менен PRIDE66 өнөктөш репозиторий аркылуу ProteomeXchange консорциумуна кошулду. Бул изилдөө учурунда алынган бардык башка маалыматтар Кошумча маалыматта, кошумча маалымат файлдарында жана чийки маалымат файлдарында берилген. Бул макала үчүн булак маалыматтар берилген.
Посттун убактысы: 2024-жылдын 08-ноябры