Өсүмдүктөр жана патогендик материалдар
Иллинойс университетинде (азыр Калифорния Университетинин Дэвис университетинде) доктор Пэт Браун тарабынан сорго конверсиясынын популяциясы (SCP) деп аталган сорго ассоциациясынын популяциясын картага түшүрүү каралган. Ал мурда сүрөттөлгөн жана АКШнын чөйрөсүндө өсүмдүктөрдүн өсүшүнө жана өнүгүшүнө көмөктөшүү үчүн фотопериодго сезгич эмес жана кичирээк бойго айландырылган ар кандай линиялардын жыйындысы. Бул изилдөөдө бул популяциядан 510 линия колдонулган, бирок начар өнүп чыгуусуна жана башка сапатты көзөмөлдөө маселелерине байланыштуу, бардык линиялар үч белгинин баарын талдоодо колдонулган эмес. Акыр-аягы, хитин реакциясын талдоо үчүн 345 линиядан алынган маалыматтар, flg22 реакциясы үчүн 472 линия жана TLS туруктуулугу үчүн 456 линия колдонулган.B. кукиLSLP18 штаммы Арканзас университетинен доктор Берт Блумдан алынган.
MAMP жооп өлчөө
Бул изилдөөдө эки башка MAMP flg22 (Genscript каталогу # RP19986) жана хитин колдонулган. Соргум өсүмдүктөрү күнөсканада топурак (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) менен толтурулган тегиздиктерге салынган кошумчаларда өстүрүлгөн. Өсүмдүктөр чогултуу күнү жалбырактардын ашыкча нымдуулугун болтурбоо үчүн үлгү чогултуудан бир күн мурун сугарылган.
Линиялар туш келди тандалып, логистикалык себептерден улам 60 линадан партиялар менен отургузулган. Ар бир лина үчүн ар бир лина экиден үрөн менен үч "идиш" отургузулган. Кийинки партиялар мурунку партия иштетилгенден кийин бүтүндөй популяция бааланганга чейин отургузулган. Эки MAMP үчүн тең эки эксперименталдык сыноо жүргүзүлдү, генотиптер эки сыноонун ар биринде кайрадан туш келди тандалып алынган.
ROS анализдери мурда сүрөттөлгөндөй жүргүзүлдү. Кыскача айтканда, ар бир сап үчүн алтыдан үрөн 3 башка идишке отургузулган. Алынган көчөттөрдөн үчөө бирдейлигине жараша тандалып алынган. Адаттан тыш көрүнгөн же көпчүлүгүнөн бир топ бийик же кыска көчөттөр колдонулган эмес. Үч башка 15 күндүк сорго өсүмдүгүнүн 4-жалбырагынын эң кең жеринен диаметри 3 мм болгон төрт жалбырак дисктери кесилген. Эки өсүмдүктөн бир жалбырактан бирден диск жана бир өсүмдүктөн эки диск, экинчи диск сууну көзөмөлдөөчү болуп калган (төмөндө караңыз). Дисктер 50 мкл H2Oдо кара 96-чуңкурлуу тарелкада өзүнчө калкып жүрдү, жарыкка тийбеши үчүн алюминий пломба менен жабылып, бөлмө температурасында түнү бою сакталды. Эртеси эртең менен 2 мг/мл хемилюминесценттик зонд L-012 (Wako, каталог № 120-04891), 2 мг/мл хрен пероксидазасы (VI-A түрү, Sigma-Aldrich, каталог № P6782) жана 100 мг/мл Хитин же 2 мкМ Flg22 колдонуу менен реакция эритмеси жасалган. Бул реакция эритмесинин 50 мкл төрт кудуктун үчөөнө кошулган. Төртүнчү кудук макеттик контроль болгон, ага MAMP кошулбаган реакция эритмеси кошулган. Ар бир тарелкага суу гана камтылган төрт бош кудук да киргизилген.
Реакция эритмесин кошкондон кийин, люминесценция SynergyTM 2 көп детекторлуу микропластина окугучу (BioTek) аркылуу 1 саат бою ар бир 2 мүнөт сайын өлчөнгөн. Пластиналык окугуч бул 1 сааттын ичинде ар бир 2 мүнөт сайын люминесценция өлчөөлөрүн жүргүзөт. Ар бир кудук үчүн маанини берүү үчүн бардык 31 окуунун суммасы эсептелген. Ар бир генотип үчүн MAMP жообунун болжолдуу мааниси (үч эксперименталдык кудуктун орточо люминесценция мааниси - макеттик кудуктун мааниси) - бош кудуктун орточо маанисин алып салуу менен эсептелген. Бош кудуктун маанилери дайыма нөлгө жакын болгон.
Жалбырак дисктериНикотиана бентамиана, сапатты көзөмөлдөө максатында ар бир 96 кудуктуу пластинага контролдук катары бир жогорку реакция берүүчү сорго линиясы (SC0003) жана бир төмөн реакция берүүчү сорго линиясы (PI 6069) киргизилген.
B. кукиэмдөө даярдоо жана эмдөө
B. кукиЭнокулят мурда сүрөттөлгөндөй даярдалган. Кыскача айтканда, сорго дандары үч күн сууга чыланып, чайкалып, 1 литрлик конус формасындагы колбаларга салынып, 15 psi жана 121 °C температурада бир саат автоклавда сакталган. Андан кийин дандар жаңы өстүрүлгөн өсүмдүктөн алынган болжол менен 5 мл мацерацияланган мицелий менен эмделген.B. кукиLSLP18 изоляттары алынып, бөлмө температурасында 2 жумага коюлуп, ар бир 3 күндө колбаларды чайкап турулган. 2 жумадан кийин, козу карын менен жабыркаган сорго дандары абада кургатылган, андан кийин талаага эмделгенге чейин 4°C температурада сакталган. Ошол эле эмдөө бүткүл сыноо үчүн колдонулуп, жыл сайын жаңы жасалган. Эмдөө үчүн 4-5 жумалык сорго өсүмдүктөрүнүн ичине 6–10 жуккан дан салынган. Бул козу карындардан пайда болгон споралар бир жуманын ичинде жаш сорго өсүмдүктөрүндө инфекцияны баштаган.
Үрөн даярдоо
Талаага себүү алдында соргунун үрөнү болжол менен 1% Spirato 480 FS фунгицидин, 4% Sebring 480 FS фунгицидин, 3% Sorpro 940 ES үрөн сакчысын камтыган фунгицид, инсектицид жана саксыз аралашмасы менен иштетилген. Андан кийин үрөндөр 3 күн бою абада кургатылган, бул үрөндөрдүн айланасына бул аралашма менен жука катмар пайда кылган. Саксыз аралашма Dual Magnum гербицидин өнүп чыга электе иштетүүгө мүмкүндүк берген.
Максаттуу жалбырак тактарына туруктуулукту баалоо
SCP 2017-жылдын 14–15-июнунда жана 2018-жылдын 20-июнунда Түндүк Каролина штатынын Клейтон шаарындагы Борбордук өсүмдүктөрдү изилдөө станциясында ар бир учурда эки эксперименталдык репликация менен рандомизацияланган толук блоктук дизайнда отургузулган. Эксперименттер ар бир участокко 10 үрөн колдонуп, 1,8 м бир катарга, 0,9 м катар туурасына отургузулган. Четки таасирлердин алдын алуу үчүн ар бир эксперименттин четине эки чек катар отургузулган. Эксперименттер 2017-жылдын 20-июлунда жана 2018-жылдын 20-июлунда эмделген, бул учурда сорго өсүмдүктөрү 3-өсүү стадиясында болгон. Баалар бирден тогузга чейинки шкала боюнча алынган, мында оорунун белгилери жок өсүмдүктөр тогуз, ал эми толугу менен өлгөн өсүмдүктөр бир деп бааланган. 2017-жылы эки баалоо, ал эми 2018-жылы ар бир жыл сайын эмдөөдөн эки жумадан кийин төрт окуу жүргүзүлгөн. sAUDPC (оорунун прогрессия ийри сызыгынын астындагы стандартташтырылган аянт) мурда сүрөттөлгөндөй эсептелген.
Жарыяланган убактысы: 2021-жылдын 1-апрели